300号石蜡油的指标?_300号石蜡油价格

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3.石油对皮肤有什么伤害

4.怎样预防猪病的发生

5.PCR扩不出来，紧急求助

常用的有水银温度计，首先说一下怎么读数。手拿住水银体温计尾部，使眼与体温计保持同一水平，然后慢慢地转动体温计，从正面看到很粗的水银柱(中间红色那根线)就可读出相应的温度值。读数时注意千万不要用手碰体温计的水银端，这样会影响水银柱而造成测量不准。每次看之前一定要拿住尾部先甩一甩，确保不是之前的读数。

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使用方法

测量口温：

(1)使用前先将温度计度数甩到35℃以下。

(2)将体温计放在舌下(含住即可、不可用力咬及说话)。

(3)至少量3-5分钟，7分钟最佳。

(4)取出体温计，读取温度数据后，用卫生纸擦拭干净，再以酒精棉片消毒(以旋转方式自尾端擦至水银端)。

温馨提示：

(1)婴幼儿、呼吸困难、意识不清者、有痉挛病史及无法合作者请勿量口温。

(2)30分钟内不可吃东西和进行剧烈运动。

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测量腋温：

(1)使用前要先将温度计度数甩到35℃以下。

(2)测量前不要洗澡，先檫去腋窝的汗，把体温表的水银端夹在腋窝中间，注意不要把表头伸到外面，如果是小孩的话注意扶住其胳膊以防移动。

(3)测量5-10分钟。

(4)取出体温计，读取温度数据后，用卫生纸擦拭体温计。

温馨提示：

(1)时间未到就拿掉或者不小心移动了的，需重新测量，时间需重新计算。

(2)喝热饮、剧烈运动、情绪激动及洗澡需待30分钟后再测量。

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测量肛温：

(1)婴儿仰卧抬腿或趴卧姿势，儿童及成人侧卧姿势。

(2)使用前要先将温度计度数甩到35℃以下。以润滑剂(凡士林或石蜡油)润滑肛表水银球端。

(3)手扳开肛门，将肛表旋转并缓慢轻轻插入，拿肛表之手同时靠於臀部固定以防滑落或插太深。

(4)插入深度：婴儿1.25公分;儿童2.5公分;成人3.5公分

(5)测量2-5分钟。

(6)取出肛表，读取温度数后，以卫生纸擦拭干净，再以酒精棉片消毒(以旋转方式自尾端擦至水银端)。

温馨提示：

(1)腹泻者及直肠疾患、手术者禁量肛温。

(2)喝热饮、剧烈运动、情绪激动及洗澡需待30分钟后再测量。

(3)肛温是最接近人体温度的，并且受环境温度影响最小，但不方便测量，不适合作筛检用。因此这种方法只有用在需要对其他测量方法进行确认的基础上。

(4)先用卫生纸将体温计擦拭干净，再读取温度数据。

其实，口温和肛温是比较接近人体温度的，只不过这些都有一定的会用限制，比如婴儿和正在长牙齿的小朋友就不适合用体温计量口温，自然“大孩子们”也就不适合量肛温了。

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电子体温计。它能快速准确地测量人体温度，与传统的水银玻璃体温计相比，具有读数方便、测量时间短、测量精度高、能记忆并有蜂鸣提示的优点，尤其是电子体温计不含水银，对人体及周围环境无害，特别适合于学校家庭、医院等场合使用。

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使用方法：

1.按下在显示屏旁边的ON/OFF按钮，显示屏将显示提示;约2秒钟，同时可以听到哔的声音；

2.松开ON/OFF按钮，显示屏显示上一次测量的温度值约2秒，之后显示标准温度37.0℃，接着显示Lo℃，开始进入测温状态；当测量到的温度超过32.0℃，体温计将不再显示Lo℃，开始显示测量到的温度值；

3.用医用酒精对感温头(商标以下部位)进行消毒，然后把感温头放置到测温的位置（口腔，腋窝，等等）；

4.每次测量通常约需60秒钟左右，感温头的温度方可达到稳定，显示屏的℃符号便停止闪烁，温度稳定约15秒后，可听到哔－哔－哔－；声响，表示测温完成；取出体温计后，温度读数将会保持一直不变；

5.如果经测量体温超过37.8℃，将发出发烧提示；哔哔哔－哔哔哔；约10秒；

6.测量完成后，体温计会自动在8分40秒后切断电源。为延长电池使用寿命，建议在测完体温并记录好后，按下ON/OFF按钮切断电源；

7.请依照相关法律要求妥善处理使用过的废电池和体温计。

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红外线耳温计。是一种专门用于测量鼓膜温度的温度计，通过红外导波管将主要由鼓膜发射的红外辐射能传送到热电堆等热探测器，将红外辐射能量转换为电能后进行电信号处理得到人体温度信息。

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使用方法：

1.按下电源/记忆键，显示屏全显，之后显示前一次测温记录，再显示预备符。

2.测量耳温：轻拉耳廓，使耳道变直，保持水平。固定头部，将探测器的前端插入耳孔并对准耳膜成一条直线。

3.按下测量键，听到“哔”一声之后，测量完成。这时可拿起耳温计读取上面的温度数值。

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柠檬酸到底是什么

黑斑病甘薯中毒是因为奶牛食了发生黑斑病的甘薯而中毒，黑斑病甘薯会产生甘薯酮、甘薯醇、甘薯宁等毒素，奶牛食后会发生呼吸困难和急性肺部水肿、气肿等。

症状

奶牛食甘薯后中毒，呼吸困难，严重气喘，呼吸增数，可达100次/分钟，体温正常，肺部听诊，呼吸音粗厉，头颈伸直，张口呼吸，并发出吭吭声。奶牛反刍停止，食欲废绝，粪便干硬，带有黏液和血液。少数病牛发病不久，则在颈部，肩部和背肋部出现皮下气肿，触诊有捻发音。严重病例，会出现窒息死亡。

治疗

（1）停止饲喂黑斑病甘薯，对病牛用0.1%高锰酸钾洗胃。

（2）灌服活性炭100克、硫酸镁300克和石蜡油500毫升，加水1000毫升一次灌服，以吸附和排出毒素。

（3）10%硫代硫酸钠200毫升，维生素C50毫升静注，缓解呼吸困难。

（4）严重呼吸困难时可输氧或用3%双氧水100毫升加到500毫升糖盐水中缓慢静注。

（5）静脉注射10%安钠咖30毫升、50%葡萄糖500毫升，缓解肺水肿。

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简介柠檬酸，又称枸橼酸，学名2-羟基丙烷-1,2,3-三羧酸，化学式为C6H8O7，是一种重要的有机酸，为无色半透明晶体或白色颗粒或白色结晶性粉末，无臭、味极酸，在潮湿的空气中微有潮解性。

柠檬酸在食品和医学上用作多价螯合剂，也是化学中间体，用于汽水、糖果等，也用作金属清洁剂，媒染剂等。

柠檬酸广泛分布于植物界中，如在柠檬、醋栗、覆盆子、葡萄汁等中，可从植物原料中提取，也可由糖进行柠檬酸发酵制得。

由于柠檬酸具刺激作用，接触者可能引起。

柠檬酸粉体与空气可形成性混合物，遇明火、高热或与氧化剂接触，有引起燃烧的危险。

天然分布天然柠檬酸在柠檬中含量较高天然柠檬酸在自然界中分布很广，天然的柠檬酸存在于植物如柠檬、柑橘、菠萝等果实和动物的骨骼、肌肉、血液中。

很多种水果和蔬菜，尤其是柑橘属的水果中都含有较多的柠檬酸，特别是柠檬和青柠——它们含有大量柠檬酸，在干燥之后，含量可达8%（在果汁中的含量大约为47g/L）。

在柑橘属水果中，柠檬酸的含量介于橙和葡萄的0.005mol/L和柠檬和青柠的0.30mol/L之间。

这个含量随着不同的栽培种和植物的生长情况而有所变化。

物理性质外观一水柠檬酸晶体

柠檬酸为无色半透明晶体，或白色颗粒，或白色结晶性粉末，无臭，虽有强烈酸味但令人愉快，稍有一点后涩味。

它在温暖空气中渐渐风化，在潮湿空气中微有潮解性。

溶解性溶于水、乙醇、，不溶于苯，微溶于氯仿，水溶液显酸性。

柠檬酸其钙盐在冷水中比热水中易溶解，此性质常用来鉴定和分离柠檬酸。

结晶形式柠檬酸立体分子结构

柠檬酸结晶形态因结晶条件不同而不同，有无水柠檬酸C6

H8O7，也有含结晶水的柠檬酸2C6H8O7·H2O、C6H8O7·H2O或C6H8O7·2H2O。

结晶时控制适宜的温度可获得无水柠檬酸。

商品柠檬酸主要是无水柠檬酸和一水柠檬酸。

一水柠檬酸是由低温（低于36.6℃）水溶液中结晶析出，经分离干燥后的产品，分子量210.14，含结晶水量为8.58%，熔点70～75℃，密度=1.542。

20℃下，100中可溶解无水物147g。

放置在干燥空气中时，处于晶体晶格中的结晶水逸出而风化。

一水柠檬酸晶体缓慢加热时，先在50～70℃开始失水，70～75℃晶体软化，开始熔化。

加热到130℃时完全丧失结晶水，最后在135～152℃范围内完全熔化。

一水柠檬酸剧烈加热时，在100℃熔化，结块变为无水柠檬酸，继续加热很精确地在153℃熔化。

一水柠檬酸晶体为斜方棱晶，晶体较大。

无水柠檬酸是由高温（高于36.6℃）水溶液中结晶析出的。

一水柠檬酸转变为无水柠檬酸的临界温度为36.6±0.15℃。

无水柠檬酸分子量192.14，熔点153℃。

无水柠檬酸晶体形态为单斜晶系的棱形-双菱锥体。

化学性质汉斯·阿道夫·克雷布斯从结构上讲柠檬酸是一种三羧酸类化合物，并因此而与其他羧酸有相似的物理和化学性质。

加热至175°C时它会分解产生二氧化碳和水，剩余一些白色晶体。

柠檬酸是一种较强的有机酸，有3个H

可以电离；加热可以分解成多种产物，与酸、碱、甘油等发生反应。

柠檬酸是在生物化学上将脂肪、蛋白质和糖转化为二氧化碳的过程中的重要化合物。

这些化学反应是几乎所有代谢的核心反应，并且为高等生物能量。

汉斯·阿道夫·克雷布斯因为发现这一系列反应获得了1953年诺贝尔生理学或医学奖。

这一系列反应称作“柠檬酸循环”、“三羧酸循环”或“克氏循环”。

主要用途柠檬酸是有机酸中第一大酸，由于物理性能、化学性能、衍生物的性能，是广泛应用于食品、医药、日化等行业最重要的有机酸。

广泛用作食品、饮料的酸味剂和剂。

亦可用作化妆品、金属清洗剂、媒染剂、无毒增塑剂和锅炉防垢剂的原料和剂。

其主要盐类产品有柠檬酸钠、钙和铵盐等,柠檬酸钠是血液抗凝剂,柠檬酸铁铵可作补血。

用于食品工业柠檬酸被普遍用于糖果和饮料的生产因为柠檬酸有温和爽快的酸味，普遍用于各种饮料、汽水、葡萄酒、糖果、点心、饼干、罐头果汁、制品等食品的。

在所有有机酸的市场中，柠檬酸市场占有率70%以上。

一分子结晶水柠檬酸主要用作清凉饮料、果汁、果酱、水果糖和罐头等的酸性调味剂，也可用作食用油的抗氧化剂

用于化工柠檬酸用作化学试剂柠檬酸在化学技术上可作化学分析用试剂，用作实验试剂、色谱分析试剂及生化试剂；用作络合剂，掩蔽剂；用以配制缓冲溶液。

用于纺织业用柠檬酸或柠檬酸盐类作助洗剂，可改善洗涤产品的性能，可以迅速和沉淀金属离子，防止污染物重新附着在织物上，保持洗涤必要的碱性；使污垢和灰分散和悬浮；提高表面活性剂的性能，是一种优良的鳌合剂。

工业用的柠檬酸，在化学技术上可作化学分析用试剂，服装的甲醛污染已是很敏感的问题，柠檬酸和改性柠檬酸可制成一种无甲醛防皱整理剂，用于纯棉织物的防皱整理。

不仅防皱效果好，而且成本低。

用于环保柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液用于烟气脱硫。

柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液由于其蒸气压低、无毒、化学性质稳定、对SO2吸收率高等原因，是极具开发价值的脱硫吸收剂。

用于禽畜生产在仔猪饲料中柠檬酸，可以提早断奶，提高饲料利用率5％～10％，增加母猪产仔量。

在生长育肥猪日粮中1％～2％柠檬酸，可提高日增重，降低料肉比，提高蛋白质消化率，降低背脂厚度，改善肉质和胴体特性。

柠檬酸稀土是一种新型高效饲料剂，适用于猪、鸡、鱼、虾、牛、羊、兔、蚕等各种动物，具有促进动物生长，改善产品品质，提高抗病能力及成活率，提高饲料转化率，缩短饲喂周期等特点。

用于化妆品柠檬酸属于果酸的一种，主要作用是加快角质更新，常用于液、霜、洗发精、美白用品、抗老化用品、青春痘用品等。

角质的更新有助于皮肤的中黑色素的剥落，毛孔的收细，黑头的溶解等。

用于柠檬酸与80℃温度联合作用具有良好杀灭细菌芽孢的作用，并可有效杀灭血液透析机管路中污染的细菌芽孢。

享有“西餐之王”美誉的柠檬具有很强的作用，对食品卫生很有好处，再加上柠檬的清香气味，人们历来喜欢用其凉菜，不仅美味爽口，也能增进食欲。

用于医药柠檬酸具有收缩、增固毛细血管并降低其通透性的作用，还能提高凝血功能及血小板数量，缩短凝血时间和出血时间，具有一定的止血作用。

制药工业用作医药清凉剂，测血钾。

食用注意作为食品剂柠檬酸为食用酸类，可增强体内正常代谢，适当的剂量对人体无害。

在某些食品中加入柠檬酸后口感好，并可促进食欲。

虽然柠檬酸对人体无直接危害，但它可以促进体内钙的排泄和沉积，如长期食用含柠檬酸的食品，有可能导致低钙血症。

儿童表现有神经系统不稳定、易兴奋、植物神经紊乱；大人则为手足抽搐、肌肉痉挛，感觉异常，瘙痒及消化道症状等。

如果误食工业柠檬酸浸泡的食品，食品中的化学残留会损害神经系统，诱发过敏性疾病，甚至致癌。

饮料或食物中含有的食用柠檬酸极少量，基本对人体无害。

生产简史世界生产史贾比尔·伊本·哈扬柠檬酸的发现始于8世纪伊朗炼金术士贾比尔。

1784年，C.W.舍勒首次从柠檬汁中结晶分离出柠檬酸。

1890年，意大利柠檬汁工厂开启了柠檬酸的工业。

1893年，C.韦默尔发现青霉菌可以以糖类为原料柠檬酸。

1917年，美国食物化学家詹姆斯·柯里发现某些类型的黑曲霉可以高效地柠檬酸。

两年后，辉瑞利用这一技术开始进行柠檬酸的。

1923年美国菲泽公司建造了世界上第一家以黑曲霉浅盘发酵法生产柠檬酸的工厂。

1950年前，柠檬酸用浅盘发酵法生产。

1952年美国迈尔斯试验室用深层发酵法大规模生产柠檬酸。

此后，深层发酵法逐渐建立起来。

深层发酵周期短，产率高，节省劳动力，占地面积小，便于实现仪表控制和连续化，成为柠檬酸生产的主要方法。

中国发展柠檬酸1942年，汤腾汉用发酵法柠檬酸是为中国最早记录。

1952年，陈声等开始用黑曲霉浅盘发酵柠檬酸。

1966年，天津市工业微生物研究所、上海市工业微生物研究所相继开展用黑曲霉进行薯干粉原料深层发酵柠檬酸的试验研究，并获得成功，从而确定了中国柠檬酸生产的这一主要工艺路线。

薯干粉深层发酵柠檬酸，原料丰富，工艺简单，不需营养盐，产率高，是中国独特的先进工艺。

10年，天津、上海、沈阳、常州等地研究单位利用解脂丝酵母(candida

lipolytica)进行石蜡油（正构烷烃）发酵生产柠檬酸的试验。

19年徐子渊等筛选出一株对氟乙酸敏感的变异株解脂丝酵母，其乌头酸水合酶的活性很低，柠檬酸的生成比例从原来的50％提高至80％，从而提高了石油发酵柠檬酸的产率。

生产方法柠檬酸发酵工艺

柠檬酸生产工艺分为水果提取法，化学法和生物发酵法三种。

水果提取法柠檬酸从柠檬、橘子、苹果等柠檬酸含量较高的水果中提取。

此法提取的成本较高，不利于工业化生产。

化学法这种方法的是以，二氯或乙烯酮的为原料的化学。

此法工艺复杂，成本高，安全性低。

生物发酵法将黑曲霉被放入含有蔗糖或葡萄糖的培养基中进行培养，以生产柠檬酸。

糖类的来源包括玉米浆、糖蜜发酵液、玉米粉的水解产物或其他廉价的糖类溶液。

在去除霉菌之后，向剩余的溶液中加入氢氧化钙，使柠檬酸反应生成柠檬酸钙沉淀，分离出沉淀之后再加入硫酸就可以得到柠檬酸。

国家标准基本信息标准号StandardNo：GB/T8269-2006中文标准名称StandardTitleinChinese：柠檬酸英文标准名称：Citricacid发布日期IssuanceDate：2006-7-18实施日期ExecuteDate：2006-12-1首次发布日期FirstIssuanceDate：1987-10-19标准状态StandardState：现行复审确认日期ReviewAffirmanceDate：编号PlanNo：20031594-T-607代替国标号ReplacedStandard：GB/T8269-1998被代替国标号ReplacedStandard:废止时间RevocatoryDate：用国际标准号AdoptedInternationalStandardNo：BP-98,USP-27标名称AdoptedInternationalStandardName：英国药典，美国药典用程度ApplicationDegree：NEQ用国际标准AdoptedInternationalStandard：国外先进标准国际标准分类号（ICS）：67.220.10中国标准分类号（CCS）：X69标准类别StandardSort：产品标准页NumberofPages:标准价格（元）Price（￥）：主管部门Governor：国家标准化管理委员会归口单位TechnicalCommittees：全国食品工业标准化技术委员会起草单位DraftingCommittee：安徽丰原生化公司、山东日照泰山洁晶生化公司、江苏宜兴协联生化公司、中国食品发酵工业研究院范围本标准规定了柠檬酸的化学名称、分子式、结构式和相对分子质量、产品分类、要求、分析方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存。

本标准适用于由淀粉或糖质原料发酵制得的柠檬酸产品。

规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可适用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T191包装储运图示标志（GB/T191-2000,eqvISO780:19）GB/T601化学试剂滴定溶液的GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的GB/T606化学试剂水分测定通用方法卡尔.费休法GB/T5009.11-2003食品中总砷及无机砷的测定GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法（neqISO3696：1987）GB/T50073-2001洁净厂房设计规范环境措施凡在中国境内从事柠檬酸生产的企业，必须建设与生产规模相适应的环保治理设施，主要污染物排放必须达到国家规定的排放标准，对不达标的企业按照有关环境保律进行停产或限产治理并予处罚。

柠檬酸行业执行《污水综合排放标准》和《大气污染综合排放标准》中相关的标准。

根据实际情况，要求企业排放的主要污染物（即水中的COD和废气中的烟尘、二氧化硫）达到国家规定的排放标准。

高浓度柠檬酸废水经过厌氧处理后，与低浓度有机废水混合进入接触氧化池，再进入气浮系统，最终出水COD要满足《污水综合排放标准》中新扩改企业发酵行业二级标准（COD≤300mg/L、SS≤200mg/L、pH=6～9）.

石油对皮肤有什么伤害

由于各种所需要的营养不同，所以培养基的种类很多。据估计目前约有数千种不同的培养基，这些培养基可根据所含成分、物理状态、以及不同的使用目的等而分成若干类型。

1.按照培养基的成分来分

培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。

(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。

(2)天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，所以常被用。

(3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。

2.按照培养基的物理状态分

培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。

(1)固体培养基。是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。

(2)液体培养基。液体培养基中不加任何凝固剂。这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，适于作生理等研究，由于发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。

(3)半固体培养基。是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。

3.按照微生物的种类分

培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。

常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基；常用的放线菌培养基为高氏1号培养基；常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基；常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）琼脂培养基和察氏培养基等。

4.按照培养基用途分

培养基按其特殊用途可分为加富培养基、选择性培养基和鉴别培养基。

(1)加富培养基。是在培养基中加入血、血清、动植物组织提取液，用以培养要求比较苛刻的某些微生物。

(2)选择性培养基。是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。

(3)鉴别培养基。是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。

营养琼脂（普通琼脂）

成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤） 100毫升

琼脂（视天气，琼脂质量而定）

制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。

用途：作普通琼脂平皿。

血琼脂平板（BA）

制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。

用途：1． 一般棉拭子均接种此培养基。

2．尿液，脓液

3．分离细菌标本用。

基础培养基 （肉膏汤BB）

成份：蛋白胨 10克 牛肉膏 5克

氯化钠 5克 水 1000毫升

制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。

用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。

2 作普通琼脂斜面。

血液培养基（大管肉汤培养基）

成份：1 新鲜牛肉浸液 1000毫升

2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕） 1g% 1毫升

3 MgSO4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升

4 枸椽酸钠 0．3g

制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。

2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。

用途：作血，骨髓培养用。

肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）

成份： 蛋白胨 10克 乳糖 10克

氯化钠 5克 琼脂 25（22）克

水 1000毫升 2%伊红溶液20毫升

0．5%美兰溶液 20毫升

制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟），冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖）

用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。

罗文斯坦培养基

成份：磷酸二氢钾 2．4克 硫酸镁 0．24克

枸椽酸钠 0．6克 天门冬素 3．6克

纯甘油（丙三醇） 12毫升 水 600毫升

马铃薯粉 30克 鸡蛋 1000毫升（约3公斤）

2%孔雀绿水溶液 20毫升

制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿）。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。

2 鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。

3 将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。

4 间歇灭菌第一次90℃1小时，第二次80℃半小时，第三次80℃半小时（或放85℃烤箱内连续二次）。

质控标准： 1 灭菌试验合格。

2 接种结核杆菌要求两星期生长良好。

用途：作结核分枝杆菌培养用。

结核半固体培养基

成份：磷酸氢二钠 19克 硫酸镁 0．6克

磷酸二氢钾 2．5克 天门冬素 5克

1%孔雀绿 1．5克 甘油 20毫升

吐温80（10%） 5毫升 水 1000毫升

枸椽酸钠 2．5克 动物血清 100毫升

琼脂 1．5克（80小时用甲醇去脂）

1%孔雀绿 0．78毫升 吐温80（10%） 5毫升

加动物血清 100毫升

制法： 1 除血清外将上述药品均称好，放入煮沸溶解，调PH7。2

2 分管（每管约10毫升）包扎好，高压，121℃半小时灭菌。

3 待冷后无菌法加无菌血清（绵羊血或兔血）每管约1毫升备用。

2 临床微生物培养基手册

4 去除琼脂方法：取琼脂若干或于三角烧瓶中加甲醇于琼脂1毫升用塞密封，放37℃温浴80小时，每天摇动一次，冷却后到时取出用滤纸过滤，待琼脂自然冷却后备用。

质控标准：1无菌实验合格。

2琼脂硬度合适而清亮。

3接种标准结核杆菌用，强度合适即可用。

用途：培养结核杆菌用。

亚碲酸钾血琼脂平板

成份：琼脂基础 100毫升 10%葡萄糖 2毫升

1%亚碲酸钾 4．5毫升 绵羊血 10毫升

制法：1将琼脂基础溶解好，加入羊血。

2马上加热使成咖啡色后，稍冷再加入10%葡萄糖2毫升与1%亚碲酸4．5毫升混合后倒入无菌平板，

2

凝固后存冰箱备用。

质控标准：接种白喉杆菌生长良好，其它革兰氏阴性菌均抑制生长。

用途：供培养及鉴别白喉杆菌用。

米培养基

成份：白米 20克 水 1000毫升

琼脂 20克 吐温80 10毫升

制法：1将20克米加水200毫升煮沸45分钟，煮时将容器盖好。

2用纱布过滤，只要米汤，不要饭，加水至1000毫升。

3加琼脂20克，吐温-80 10毫升煮溶，分装中型管（每管约3毫升），包扎好，高压，121℃半小时，消毒备用。

质控标准：1灭菌。

2要求清亮。

3接种白色念珠菌17-24小时生长良好，并产生厚膜孢子。

用途：培养白色念珠菌用。

蛋白胨水培养基

成份：蛋白胨 1克 氯化钠 0．5克

水加至 100毫升 PH调至 7．8

制法：把以上各物称好溶于水，调节PH7．6分装消毒备用。

质控标准：1 放置37℃无菌生长。

2 接种大肠杆菌24小时生长良好。

3 可作中国兰平板基础液。

可作靛基质基础液（作此试验需要色氨酸蛋白胨）。

血培养基

成份：蛋白胨 10克 牛肉膏 5克

氯化钠 5克 葡萄糖 3克

枸椽酸钠 3克 MgSO4。7H2O 20毫升

0．5%PABA 10毫升 酵母浸液 10毫升 0．2克（2%过滤）

*酚红0．4% 6毫升 水 1000毫升

琼脂 0．5克

*：作大BB，小BB时，不要加酚红和琼脂。

制法：1。除PABA、硫酸镁、酚红外均称好煮化调PH7．4

2。调好PH后再加酚红。

3。硫酸镁、PABA另外无菌再加入（亚细，小BB）

沙氏培养基

成份：蛋白胨 1克 水 100毫升

琼脂 1．5克（琼脂粉1克%） 葡萄糖或麦芽糖 4克

3

制法：1将上述物质称好，放入水中煮沸溶解（不必调PH即有5左右）分中号试管（约4毫升）包扎，高压115℃20分钟。

2 趁热斜好，凝固备用。

质控标准：1无菌试验合格。

2接种霉菌比在其它培养基上生长良好，其它菌生长不好。

用途：作分离培养霉菌用。

注意：1 接种临床新鲜标本可先加1-2滴70%酒精让干后再接种于含12．5%氯霉素沙氏斜面培养基上。

2 也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麦芽糖。

肉渣培养基

成份： 牛肉渣 牛肉浸液（牛肉膏）

制法：将做牛肉浸液的牛肉渣，装入试管，高约3毫米，加入牛肉浸液或牛肉膏汤（PH7．6）约5毫升，比肉渣高一倍，液面上加入已溶解的凡士林，高约0．5厘米（不加也可），121℃高压灭菌20-30分钟后保存于冰箱内备用 。

用途：用于厌氧菌培养。

注意：如无肉渣也可用牛、羊血等代替，将血块先放入水内煮沸，取出成小块，血块在加热后摇匀成碎颗粒状。

单糖发酵管培养基（半固体）

3 临床微生物培养基手册

成份： PH7．6-7．8蛋白胨水 1000毫升（0．3克/100毫升）

1．2%酚红液 0．4毫升

琼脂 0．4 - 0．5克

10%糖或醇 10毫升

制备：把蛋白胨水，琼脂加热溶解，然后加1．2%酚红液0．4毫升，10%糖10毫升，混匀，分装试管，每管约2-3毫升，经115℃高压灭菌20分钟后，分置于试管架上，贴上各类糖或醇类标签备用。

质控标准：细菌发酵糖类或醇而产生酸，能使培养基PH改变，指示剂由红变**，如因发酵产生气体则

半固体内产生气泡，如有动力则半固体由清亮变混浊。

明胶培养基

成份：肉浸液 1000毫升（牛肉浸膏5克）

明胶 12克

制法：

100毫升肉浸液中，加入明胶12克，隔水加热煮化，校正PH7．2，分装小号试管，用阿诺氏间歇灭菌80℃30分钟，连续3日，或者108℃高压20分钟，冷却，贮存备用。

碱性蛋白胨水

成份：

蛋白胨 20克 氯化钠 5克

硝酸钾 0．1克 结晶碳酸钠（NaclCO3．12H2O） 0．2克

水 1000毫升

4

制法：将蛋白胨，Nacl，硝酸钾，结晶碳酸钠称好，溶于1000DW中，校正PH8．4分装试管，121℃高压

灭菌15分钟后备用 。

用途：用于霍乱弧菌培养。

葡萄糖蛋白胨水（M。V用）

成份：蛋白胨 5克 葡萄糖 5克

K2HPO4 5克 水 1000毫升

制法：将上述称好溶解分装试管，调PH7．4高压灭菌115℃ 灭菌20分钟 ，或者葡萄糖加热煮沸后再倒试管

标准：灭菌试验合格。

接种大肠杆菌VP阴性，M阳性；接种产气杆菌VP阳性，M阴性。

用途：作鉴别肠道杆菌用。

枸椽酸盐培养基

成份：磷酸二氢铵 0．1克 硫酸镁 0．02克

磷酸氢二钾 0．1克 枸椽酸钠 0．23--0．5克（0．36）

氯化钠 0．5克 琼脂 1．5克

0．5%溴麝香草酚兰2毫升 （调PH6．8再加）

制法：将上述称好，放入水中煮沸溶解，调PH6．8，然后分装中号试管，高压灭菌，趁热倒呈斜面，凝固

后备用。

标准：1灭菌试验合格，培养基呈果绿色适宜。

2接种大肠杆菌，培养基上不生长，也不变色。

3接种产气杆菌，培养基呈深兰色。

用途：作鉴别大肠杆菌用。

双糖铁培养基

成份：

下层：蛋白胨 1克 氯化钠 0．5克

葡萄糖 0．2克 琼脂 0．3-0．5克

水 100毫升

将上述物质混匀调PH7．6后加1．2%酚红0．4毫升

上层：蛋白胨 1克 氯化钠 0．5克

乳糖 1克 硫代硫酸钠 0．03克

硫酸亚铁 0．02克 琼脂 1克

水 100毫升

制法： 1将下层配好，分装中号试管（1毫升），塞好包扎，15磅高压灭菌半小时，使凝固后备用。

2制上层时，先将蛋白胨水制好，加入硫酸亚铁，硫代硫酸钠，加热溶解PH8．1，再加入酚红分瓶，（每瓶300毫升，称取琼脂包扎灭菌，趁热加入乳糖隔水煮沸30分钟或112℃消毒15分钟）。

3取已制的下层管，每管用无菌法倒入上层液约1。5毫升，边斜放置使成斜面，凝固后备用。

标准：无菌试验合格，接种大肠杆菌下层产酸产气，上层产酸。

尿素培养基

成份：蛋白胨 0．1克 氯化钠 0．5克

磷酸二氢钾 0．2克 尿素 0．2克（或10%2毫升）

葡萄糖 0．01克（或10%葡萄糖0．1毫升）

H2O 100毫升 酚红（0．2%） 0．4毫升

4 临床微生物培养基手册

制法：1除葡萄糖，尿素外把其它药品称好放入水中煮沸，使溶解，调PH7．2过滤，15磅高压灭菌15分钟．

2配制尿素（灭菌）液：每100毫升基液内加2毫升．

3配制10%葡萄糖（灭菌）每100毫升加0．1毫升．

4分装小试管待用．

标准：

1灭菌试验合格．

2接种变形杆菌24小时呈红色．

用途：鉴定变形杆菌用．

胆盐中性红琼脂

成份：蛋白胨琼脂PH7．2-7．4 5000毫升

胆 盐 2．5克

乳糖 5．0克

对氨基苯甲酸 25毫克

1%中性红溶液 25毫升

制法：

将胆盐，对氨基苯甲酸，乳糖趁热加入已灭菌之蛋白胨琼脂中，待冷至50-60℃时，加入1%中性红液2．5毫升，混合后即倾注平皿，凝固待用．

*：1%中性红：1克中性红加酒精60毫升，加水40毫升

丙二酸盐培养基（缩苹果酸钠）

成份：丙二酸钠 0．3克 酵母浸膏 0．1克

Nacl 0．2克 硫酸铵 0．2克

K2HPO4 0．06克 KH2PO4 0．04克

水 100毫升

PH6．8，高压灭菌备用．

0．2%溴麝香酚兰乙醇 1．25毫升

制法：与枸椽酸盐利用试验相类似，是测定细菌能否利用丙二酸盐与碳源．无机铵盐为氨源而生长，生长者使培养基变成碱呈兰色．

鉴定： 克氏杆菌 （+） 赫夫尼亚 （+）

沙门氏菌 （—） 痢疾杆菌 （—）

苯丙氨酸培养基

成份：酵母浸液 1．5克 DL--苯丙氨酸 1克

磷酸氢二钠（无水）0．5克（或L-苯丙氨酸 0．5克）

氯化钠 2．5克 琼脂 6克

水 500毫升 PH7．4

制法：1 将上述成份加热溶解，分装于12*125mm口径的试管中，每管约4毫升．

2 高压灭菌15磅10分钟，趁热使试管斜置凝固后备用．

3 接种时划斜面．

用途：鉴定沙门氏菌用．苯丙氨酸脱氨酶试验沙门氏菌阴性．

双抗培养基

成份：

蛋白胨 10克 牛肉膏 5克

氯化钠 5克 无水亚硫酸钠 3克

柠檬酸钠 10克 蔗糖 10克

琼脂粉 20克 水 1000毫升

制法：

1将上物称好，加热溶于水中．

2调PH8．2—8．4

3 分装高压灭菌后备用．

倾注平板前先加热溶解琼脂等冷至50℃左右，按无菌操作加入多、庆抗菌素充分摇匀， 倾注平板，凝固后备用．

（庆大霉素：150u/毫升，多粘菌素：1500u/毫升, 2毫升加至1000毫升培养基内，此相当于庆大霉素0.3u/毫升, 多粘菌素3u/毫升）

O2培养基

保存液：（文—腊氏液）

A液：硼酸 12．405克 KCL 14．912克

水 1000毫升

取A液250毫升 0．8%NAOH 133．5毫升

NACL 20克 水 1000毫升

分装高压灭菌．

硝酸盐胨水

成份：

蛋白胨 1克

硝酸钾（无NO2） 0．1克

H2O 100毫升

PH7．4，高压灭菌分装备用．

（如无硝酸钾也可用硝酸钠0．02克，NACL0．05克，H2O100毫升）

用途：硝酸盐还原试验用．

原理：测定细菌能否还原硝酸盐为亚硝酸盐，后者在酸性条件下与a—萘胺和对氨基苯磺酸发生重氮反应，生成红色的1-萘-4偶氮苯对磺酸．

制法：试剂甲液A对氨基苯磺酸0．8克溶于5N的醋酸100毫升．

B：乙液a-萘酚0．5克溶于5N的醋酸100毫升中

将细菌接种于硝酸盐水中37℃培养24--96小时，加入甲液0．1毫升，再加入乙液数滴，立即呈现红或紫色为阳性

5 临床微生物培养基手册

king氏培养基（能促进绿脓菌绿色素产生）

成分：

蛋白胨 2克 K2SO4 1克

甘油 1克 MGCL2 0.14克

琼脂 1.5克 H2O 100毫升

KING氏培养基（能促进绿脓菌荧光色产生）

成分：

蛋白胨 2克 甘油 1克

K2SO4 0.15克 MGSO4 4.7克 H2O 0.15克

琼脂 1.5克 H2O 100毫升

调PH7.2 15磅20分钟消毒后使成斜面备用．

七叶苷水解试验

原理：

粪链球菌能分解七叶苷（Escalin）其代谢产物与铁离子结合产生黑色沉淀，使培养基变黑．

方法：

将菌种接种在七叶苷或琼脂上37℃18小时，观察结果，培养基变黑色，其他链球菌能生长但不变黑色，肺炎链球菌不长．

成分：

七叶苷 0.1克 胰胨 1.5克

枸橼酸铁 0.2克 琼脂 2.0克（0.5克/50毫升）

胆汁 2.5毫升 H2O 100毫升

PH7.0分装小试管内高压灭菌后备用（10磅20分钟）

七叶苷又名桑树皮甙，七叶灵，Aesclin Escnlim Bicolorin等．为白色针状结晶．水溶液兰色荧光．）

葡萄糖氧化发酵培养基（O/F）

成份：

蛋白胨 2．7克 氯化钠 5．0克

0．2%溴麝香酚兰 0．03克 琼脂 3克

KH2PO4 0．3克 葡萄糖 10．0克

水 1000毫升

制法：以上成份除糖外，溶解调PH7．0，10磅高压灭菌20分钟后备用．

方法：挑取少量培养物接种两管，其中一管接种后加液体石腊不少于1厘米厚，两管同时35℃，培养过夜，

观察颜色的变化，若无颜色变化，需继续观察七天，每日观察刺层型别．

用途：适用于微球菌科和非发酵菌的鉴定．

麦康凯培养基

成份：

蛋白胨 20克 氯化钠 5克

乳糖 10克 琼脂 20克

H2O 1000毫升 1%中性红溶液 3--4毫升

1%结晶紫 0．1毫升 PH7．4

除中性红临时用时加入外，其余均高压灭菌备用．

邻硝基酚半乳糖甙（ONPG）酶试验

缓冲液：

Na2H2PO4 6．9克 溶于40DW中，用5NNOH调PH7．0，再加水到50毫升，冰箱保存．用前若有结晶可稍加温，溶解后再用．

ONPG液：

称取ONPG（邻硝基酚--B--D半乳糖苷）80毫克，溶于15毫升D.W中，再加上缓冲液5毫升，放入冰箱中保存．此液不稳定，如出现**即不能用．

鉴别：

脑膜炎球菌和乳糖球菌及沙门氏菌属与枸橼酸菌属及亚利桑那氏菌属．

脑膜炎球菌和沙门氏菌属为阳性．

乳球菌，枸橼酸菌属和亚利桑那菌属为阳性．

半固体培养基

成份：

牛肉膏 3克 蛋白胨 10克

氯化钠 5克 琼脂 2．5--4克

水 1000毫升

校正PH7．4，15磅高压15分钟．倾注平板，厚度约4mm，冷藏备用．

氨基酸脱羟试验培养基

成份：

L-氨基酸 0．5克 蛋白胨 0．5克

牛肉膏 0．5克 葡萄糖 0．05克

吡多醛 0．5克 水 100毫升

2%溴甲酚紫乙醇液 0．5毫升 2%甲酚红 0．25毫升

制法：除指示剂及氨基酸外，溶解，PH6．0，然后加入氨基酸（必要时重新调PH）及指示剂，混匀分装1毫升/管加10毫米厚石蜡油，高压10--15磅10--15分钟灭菌备用．

6 临床微生物培养基手册

注意：

1 使用DL型AA时量加倍．

2 最好同时接种空白管（即不含有AA的同样培养基）作对照．

3 培养基超过24小时可出现阳性．

葡萄糖酸盐培养基

成份：

蛋白胨 1．5克 酵母浸液 1克

K2HPO4 1克 葡萄糖酸钾 40克

DW 1000毫升

溶解过滤分装，高压10磅15分钟．

结果：加班氏试剂，加热观察结果．

黄-橙色为阳性． 无颜色变化为阴性．

这些是我在网上摘的别人的 下面给了连接

怎样预防猪病的发生

偶尔接触，只要用清水冲洗干净，是不会有伤害的，如果长期接触是非常有害。这主要是因为石油里含有大量的苯。

1，皮肤经常接触苯，会导致皮肤红肿，干燥，起水泡，还可以导致刺激性皮炎及中枢和周围神经功能障碍。

2，由于苯的挥发性大，暴露于空气中很容易扩散。人和动物吸入或皮肤接触大量苯，会引起急性和慢性苯中毒。有研究报告表明，引起苯中毒的部分原因是由于在体内苯生成了苯酚。

苯对中枢神经系统产生麻痹作用，引起急性中毒。重者会出现头痛、恶心、呕吐、神志模糊、知觉丧失、昏迷、抽搐等，严重者会因为中枢系统麻痹而死亡。少量苯也能使人产生睡意、头昏、心率加快、头痛、颤抖、意识混乱、神志不清等现象。摄入含苯过多的食物会导致呕吐、胃痛、头昏、失眠、抽搐、心率加快等症状，甚至死亡。

3，吸入20000ppm的苯蒸气5-10分钟便会有致命危险。

长期接触苯会对血液造成极大伤害，引起慢性中毒。引起神经衰弱综合症。苯可以损害骨髓，使红血球、白细胞、血小板数量减少，并使染色体畸变，从而导致白血病，甚至出现再生障碍性贫血。苯可以导致大量出血，从而抑制免疫系统的功用，使疾病有机可乘。有研究报告指出，苯在体内的潜伏期可长达12-15年。

妇女吸入过量苯后，会导致月经不调达数月，卵巢会缩小。对胎儿发育和对男性生殖力的影响尚未明了。

PCR扩不出来，紧急求助

高热病（混感蓝耳病）

发病特点

1、发生在气温较高的季节，病程长，一般在5～20天左右，病死率高。2、猪场对防疫工作不重视、技术人员保健观念差，没有严格封闭猪场、没有对猪群进行系统的保健的猪场发病严重。3、发病猪的体重一般在20～80kg，发病率最高，也有断奶后的仔猪和母猪发病。4、药物治疗效果不太理想，乱用药的猪场死亡率更高。

临床症状

发病猪体温升高至40～42.5℃，精神沉郁，食量下降或食欲废绝，患猪皮肤发红，耳后耳边缘发绀、腹下和四肢末梢等身体多处皮肤有斑块状，呈紫红色；呼吸困难，喜伏卧，部分猪出现严重的腹式呼吸，气喘急促，有的表现喘气或呈不规则呼吸；部分患猪流鼻涕、打喷嚏、咳嗽、眼分泌物增多，大部分猪有泪斑，出现结膜炎症状；部分猪群便秘，粪便秘结，呈球状，尿黄而少、混浊，颜色加深。病程稍长的病猪全身苍白，出现贫血现象，被毛粗乱，部分病猪后肢无力，个别病猪濒死前不能站立，最后全身抽搐而死。发病猪群死亡率很高，有的猪场甚至高达90%。部分母猪在怀孕后期(100～110天)出现流产，产死胎，弱仔和木乃伊。

一、按猪生长阶段的用药方案：

《一》、断奶前后十天，用药目的控制断奶应激，增强猪体体质，净化疫病（萎鼻、蓝耳、圆环、支原体）等。

1、盐酸多西环素500g 金芪强500g 灵芝金维300g/500kg饲料

2、特效氟美欣200g 灵芝金维300g/500kg饲料

3、特效泰乐菌素100g 灵芝金维300g 金芪强300g/500kg饲料

《二》、30—60kg之间，猪只本阶段的生理因素造成呼吸道病多发，强化用药，避免“18周龄墙”对猪的伤害。

1、特效阿米卡星200g 灵芝金维300g/500kg饲料

2、特效泰乐菌素100g 灵芝金维300g/500kg饲料

3、特效多西环500g 磺胺六甲氧嘧啶钠300g 小苏打300g 灵芝金维300g/500kg饲料

二、按季节气候变化可选用的用药方案：

《一》、冬春季节以预防气喘病、链球菌、5号病、腹泻性疾病为主，可选用方案：

1、特效泰乐菌素100g 特效多西环素500g 金芪强300g/500kg饲料

2、阿莫西林500g 毒疫康300g /500kg饲料

3、特效氟美欣200g 金芪强300g 灵芝金维300g/500kg饲料

二》、夏秋季节以预防高热病、血虫病、中暑、呼吸系统疾病为主，用药方案为：

1、菌虫统治500g 金芪强300g 灵芝金维300g 金伊维200g/500 kg饲料

2、阿莫西林300g 灵芝金维500g/500kg饲料

3、特效氟美欣200g 特效多西环素200g/500kg饲料

猪场常备药物：金芪强、氟美欣、毒疫康、特效金伊维、菌虫统治、灵芝金维、阿莫西林、特效型泰乐菌素、特效型多西环素、特效阿米等。

猪场常见皮肤病

对目前猪场常见皮肤病进行归纳与总结，以供参考：

1、细菌性疾病

1.1口腔坏死杆菌病

此病是仔猪皮肤受伤而断发感染坏死梭状杆菌（Fusiformis necrophorus）引起，常见病变为双侧脸颊或口腔溃疡。本病主要因缺乏经验的养猪人员未能正确断齿、仔猪吮浮时相互争斗受伤被感染而致。另外窝产仔数较多时，其中瘦弱仔猪常发生面部坏死；母猪无乳或乳汗减少时仔猪常发。

治疗时先将痂皮刮除，以3%过氧化氢溶液或0.1%高锰酸钾溶液冲洗，再涂上抗生素药膏。严重的病例，应同时注射抗生素如青链霉素连续3天。防制措施为出生的后24小时内，剪掉仔猪高出牙床部分的犬齿和侧切齿。断牙器械必须严格消毒。大窝仔猪分散饲养，以避免吮乳时相互抢争乳头。并同时注意产房卫生和防制母猪射乳缓慢等疾病。

1.2猪油皮病

此病常发生于1- 4周龄猪只，由葡萄球菌（Staphylococcus）所引起。此病通过打架咬伤，粗糙地面磨擦及患疥螨发痒抓伤等伤口感染而引起。其发病率10%- 90%，死亡率为5%-90%（平均为20%）。主要症状为逐渐形成厚膜皮肤变得黏湿及呈油脂状，随后形成龟裂硬层，皮毛粗刚，另外四肢蹄上还有创伤。

本病治疗效果不一，病发早期，以针剂抗生素治疗可收良效，感染的部分可彩局部皮肤防腐剂如碘仿冲洗，大量发生时用阿莫西林、土霉素或TMP增效磺胺群体拌料或饮水给药治疗。疾病暴发时，应注意搞好卫生，尤其是产房和仔猪舍卫生。增加日粮中锌和B族维生素（尤其是生物素）的含量有利于该病的治疗。仔猪为断奶后混群饲养时连续3天喷洒皮肤消毒剂（如季胺盐类络合碘、氯二苯酚）可避免断奶后因争斗引起的油皮病暴发。控制疥螨对防制该病也是有必要的。此外，打耳号的器具不干净、剪除犬齿不合理，地面粗糙及分娩栏不卫生等也可引起。

1.3猪丹毒

猪丹毒是由猪丹毒杆菌（ Erysipelothrix rhusiopathiae）所引起的传染病。急性猪丹毒的特点为败血症和突然死亡。亚急性猪丹毒患猪的皮肤则可能出现红色疹块。亚急性猪丹毒为良性，主要症状为颈、背、胸、臀及四肢外侧出现多少不等疹块；疹块方形，菱形或圆形，稍凸于皮肤表面，紫红色、稍硬。疹块出现 1-2日体温逐渐恢复，经1-2周痊愈。急性或亚急性猪丹毒耐过后常转变成慢性型。慢性型以跛行和皮肤坏死为特征。发病初期为关节疼痛和发热，随后变成肿胀和僵硬。

选用大剂量青霉素治疗，每天1次，连续3-5天。病情较重的猪两次注射时装间隔为12小时。目前猪丹毒菌苗用于预防有良好效果。

2、性疾病

猪痘时一种典型的痘感染，主要发生于青年猪。皮肤损伤是猪痘感染的必要条件，猪虱及其他吸血昆虫对皮肤损伤使得以进行皮肤，大多数患畜在三周后恢复。病变皮肤位地背部、腹部、腹股泡及大腿内侧，病变开始为丘疹，然后发展成水疱，水疱容易破裂，水疱破后结痂，若继发感会形成脓疱。在临床须与疥螨相区别，无并发性皮肤病的猪痘不会发痒。猪痘无特效疗法，治疗目的在于防止细菌继发感染，控制猪痘的最佳方法，莫过于加生管理及清除一切外。

2.2猪瘟

猪瘟由披盖科的瘟引起。急性狸曾可见腹部、鼻、耳、股部出现弥散性红斑，随后皮肤变为紫色。耳边、尾、外阴可能发生坏死。全身被毛稀少，据报道，子宫内感染的仔猪患有先天性脱毛。

3、病

疥螨病（Scabies）

疥螨病为猪皮肤病中最常见的一种，很少猪场不受猪疥螨侵扰。营养不良、管理不善、卫生差的猪群更易发病。严重的疥螨病不但影响增重率及料肉比，而且可造成猪只庆激。头部病变为初期症状，受感染的部分是耳朵、眼周及鼻部。然后病变蔓延到体及四肢，严重的感染波及全身。疥螨病的重要临床症状是搔痒。患畜会磨擦其患部使皮肤变红，皮肤损伤与脱毛，表皮过度角化。患疥螨病的仔猪可能会爆炸性发感染油脂病。在猪场当发现一大群猪有搔痒现象时，常是疥螨感染的征兆。疥螨也比较容易检查，最常见方法有两种：（1）将患部（最好是耳朵）痂皮置于黑纸上几分钟，轻击或轻吹，疥螨掉下粘在黑纸上，用放在镜很容易观察到，（2）将鳞悄或皮肤刮取物浸泡于10%NaOH或KOH溶液中24小时，离心浓缩，取沉淀于玻片上，用低倍镜检查。

用1-2%敌百虫，伊维菌素或多拉菌素（如通灭）都有良好效果。切记疥螨治疗应全部猪只用药而非某部分猪群，单独治疗严重疥螨患畜而忽略其他猪会导致疥螨反复出现。

4、环境病

4.1晒斑

晒斑常发生于开放饲养，长时间受太阳光照射引起；青年猪和从未接触阳光的猪群患病较严重。日照数小时内，即出现红斑并不断增大，以背部、耳后多见。皮肤水肿，患处发热，触摸疼痛，病情较重的猪步态缓慢，偶尔可见肌肉突然颤搐，骤然跳跃，患处皮肤干燥形成鳞屑、脱皮。

简单有效的治疗方法是在皮肤上涂一层刺激性小的油，如植物油或轻矿物油，应避免动物直接日晒，提供足够的遮荫设施。

4.2皮肤坏死

粗糙地面所致的膝、蹄冠、肘、跗节以及蹄上的皮肤坏死最为普遍。小猪出生数天后即可出现，1-2周内病变扩展到最大，随后开始恢复。3-4周内新生的上皮已盖满坏死部位，有的小猪会发生乳房及尾巴的皮肤坏死。

预防主要在于防止受伤，由于粗糙地板会引起皮肤坏死，改善地面或在分娩铺上软势都会达到良好的效果。受伤部位用碘酊涂擦。

5、营养物质缺乏症

营养物质缺乏或过多会引起皮肤病变，典型的病变形式为被毛差、脱毛、角化不全和性皮炎。

秘需脂及酸缺乏时，皮肤色暗、被毛干燥，有鳞屑的脂溢性皮炎、耳部、腑窝处、肋腹下有褐色渗出物。随后有可能出现坏死皮疹掉毛。

核黄素（VB）缺乏此起皮炎，病变部位有鳞屑、溃疡、掉毛，大量的皮脂渗出物。病猪可能伴有结膜炎、眼睑水肿、白内障。母猪表现为不育、瘦弱、泌乳困难。

泛酸缺乏的症状是猪生长缓慢，咳嗽、腹泻、脱毛、眼周转有深褐色渗出物，并伴有皮炎。共济失调，即"鹅步"，也是其典型特征。

生物素缺乏引起皮肤病变的特征为：皮炎、皮肤干燥、粗糙，有鳞屑，结痂、褐色渗邮物，全身性脱毛、溃疡。蹄部病变表现为足底青肿，糜烂溃疡，蹄壳开裂等。

维生素A、维生素C、维生素E缺乏与皮肤鳞屑样病变有关，VE和硒缺乏还与耳坏死有关

饲料中营养物质应全面，并根据具体情况取相应措施。

6、先天性和遗传性疾病

玫瑰糠疹（银屑样脓疱性皮炎）

此病的病因目前还不清楚，但该病具有遗传性，患有本病的种猪所产仔猪更易感染。长白猪发病率较高。玫瑰糠疹常见于3-14周龄的青年猪。全窝或一窝中少数仔猪感染。病变最妆为腹部、股内侧皮肤出现小的红斑丘疹。丘疹隆起但中央低、呈现火山口状，迅速扩展天项圈状，外周呈鲜红色并隆起。项圈内为鳞屑，随着项圈的扩展，病灶中央恢复正常。当项圈扩展成为嵌合体形式时相互融合。通常不掉毛、少见瘙痒。本病一般持续4周，然后自行缓慢减退，创面愈合后皮肤恢复正常。

治疗效果不佳。良好的卫生条件可减少继发感染；存栏密度高，高温高湿为会使发病率升高。最好能从种猪如淘汰所产仔猪患有本病的种猪。

7、杂病

猪皮炎和肾病综合症（PDNS）

PDNS最早在英国记述，被认为是一种免疫介导的水疱，影响皮肤和肾。据有关报道，PDNS可能与PCV2感染有关。本病典型特征为皮肤病变，体重减轻，四肢水肿，脉管炎、肾小球肾炎。

本病多发于20-65kg的育肥猪，最显著的临床症状为皮肤病变，体重迅速减轻，精神沉郁。皮肤病变形式多样，从大的红斑，斑点，出血性丘疹，到深褐色或黑色坏死的厚痂。主要见于耳、面部、肢下部、猪体后部、公猪阴囊、母猪外阴等。

由于病因不清，防制本病有一定困难。根据笔者经验，取以下措施对防制本病有一定效果。

（1）产房、保育舍和生长育肥舍都应该严格遵守全进全出的饲养制度。绝对禁止上一批僵猪、病猪放入下一批健康猪群中饲养。

（2）确保仔猪的温度。断奶后1、2周的温度最好在30摄氏度以上，以后每周下降2度，直至常温；昼夜温差不能太大；防止贼风侵入，特别在冬季。

（3）断奶、转群、高密度、换料、断水都是非常强烈的应激反应，从而导致抵抗力下降。虽然不能完全避免应激反应，但应取措施保证应激瓜造成的损失降到最低。

（4）仔猪的营养一定要平衡，在饲料中添加的氨基酸一定要充足，并且应该多加一些维生素、微量元素等，如维生素A、E的量至少要达到营养标准的4-5倍，提高仔猪的抵抗力。

（5）一定要作好猪瘟、伪狂犬疫苗，控制好这两种性疾病。

（6）可以用仔猪3、7、21日龄各注射一针得米先，每次0.5ml。

（7）断奶前后7天，于饲料中添加抗生素、电解质或多维。

（8）在各种措施作得较好的情况下，病情还是难以控制，可用自家组织灭活疫苗来预防，有些猪场取得较好效果。

仔猪梭菌性肠炎

仔猪梭菌性肠炎又叫仔猪红痢或仔猪传染性坏死性肠炎等。本病的主要特征是排出红色粪便，肠坏死，病程短，致死率高，常常造成初生仔猪整窝死亡，损失很大。

一、临床症状

最急性型：仔猪初生当天就发病，可出现出血性腹泻（血痢），后躯粘满带血稀粪。病猪精神不振，走路摇晃，随即虚脱或昏迷、抽搐而死亡。部分仔猪无血痢而衰竭死亡。

急性型：病程一般可维持2天左右，拉带血的红褐色水样稀粪，其中含有灰色坏死组织碎片，病猪迅速脱水、消瘦，最终衰竭死亡。

亚急性型：发病仔猪一般在初生后5-7天死亡。病猪开始精神、食欲尚好，持续性的非出血性腹泻，粪便开始为**软便，后变为清水样，并含有坏死组织碎片，似米粥样。随病程发展，病猪逐渐消瘦、脱水，于出生后5-7天死亡。

慢性型：病程一至数周，呈间歇性或持续腹泻，粪便为灰**、黏液状，后躯粘满粪便的结痴。病猪生长缓慢，发育不良，消瘦，最终死亡或形成僵猪。

二、病理变化。胸腔和腹腔有多量樱桃红色积液，主要病变在空肠，有时也可延至回肠，十二指肠一般无病变。

最急性型：空肠呈暗红色，与正常肠段界线分明，肠腔内充满暗红色液体，有时包括结肠在内的后部肠腔也有含血的液体。肠黏膜及黏膜下层广泛出血，肠系膜淋巴结深红色。

急性型：出血不十分明显，以肠坏死为主，可见肠壁变厚，弹性消失，色泽变黄。坏死肠段浆膜下可见高粱米粒大小或小米粒大数量不等的小气泡，肠系膜淋巴结充血，其中也有数量不等的小气泡，肠黏膜呈**或灰色，肠腔内含有稍带血色的坏死组织碎片松散地附着于肠壁。

亚急性型：病变肠段黏膜坏死状，可形成坏死性膜，易于剥下。

慢性型：肠管外观正常，但黏膜上有坏死性膜牢固附着的坏死区。其他实质器官变性，并有出血点。

三、诊断。根据本病多发在3日龄以内仔猪，以拉血痢，病程短，死亡率高，病变肠段为空红色，界线分明，肠黏膜坏死，肠浆膜下肠系膜和肠系膜淋巴结有小气泡形成等特征，一般可以做出诊断，如有必要可进行实验室诊断。

1、细菌学检查：无菌取心血、肺、胸水、腹水、肝、十二指肠和空肠内容物、脾、肾等脏器模片，染色阳性，发现两端钝圆的单个或双个杆菌，有荚膜，芽孢位于菌体的中央，直径稍大于菌体的大型杆菌。十二指肠、空肠内容物在80℃水浴加热30分钟后，分别接种于肉肝汤和肉肝胃膜汤中，37℃培养4小时，开始出现小气泡，18小时后大量的气体将试管中固体石蜡冲至试管顶部。培养基均匀混浊，由橙色变成**。肝片不变黑而呈肉红色。血平板接种，厌氧培养4小时，有溶血。

2、毒力试验：⑴泡沫肝试验。取分离菌肉汤培养物3毫升给家兔静脉注射，1小时后将兔处死，放于37℃恒温8小时，剖检，见肝脏充满气体，出现泡沫肝现象。镜检肝，可见大量革兰氏阳性菌。⑵肠毒素试验。取刚死亡的急猪的空肠内容物或腹腔积液，加等量生理盐水搅拌均匀后，以3000转/分钟离心30-60分钟，取上清液静脉注射体重18-22克的小鼠5只，每只注射0.2-0.5毫升，同时以上述滤液与C型魏氏梭菌抗毒素混合，作用40分钟后，注射于另一组小鼠，以作对照。如注射滤液的一组小鼠迅速死亡，而对照组不死，可确诊为本病。

四、防治。⑴治疗：本病发病急、病程短，往往来不及治疗。在常发病猪场，可在仔猪出生后，用抗生素如青霉素、链霉素、土霉素、痢特灵进行预防性口服。病仔猪用青霉素口服治疗有一定效果。⑵预防：本病治疗效果不佳，重在预防。⑶免疫接种：对常发病猪场，给怀孕母猪产前1个月及产前半个月各肌肉注射仔猪红痢氢氧化铝菌苗5-10毫升，以后每次在产仔前半个月注射3-5毫升，能使母猪产生坚强的免疫力。初生仔猪可从免疫母猪的初乳中获得抗体，对仔猪的保护力几乎可达 100%。

产房要清扫干净，并用消毒药进行消毒，母猪奶头要用清水擦干净，以减少本病的发生和传播。

猪的葡萄球菌皮炎病

猪的葡萄球菌皮炎病(又称为猪传染性渗出性皮炎、溢脂性皮炎或煤烟病),是由表皮葡萄球菌所致的一猪高度接触性皮肤病。初生哺乳子猪最易感染。

临床症状

病猪出现红斑处发生3毫米~4毫米大小的微**水疱，并迅速破裂，渗出晴朗的浆液或黏液，与皮屑、皮脂腺和污垢混合，逐渐蔓延至全身表皮，干燥后形成微棕色磷片状结痂，发痒，常在墙角、粗糙物体上擦痒。痂皮脱落，露出鲜红色创面。随着病情继续发展，体温升高，猪体消瘦，全身性皮肤发红，出现黄褐色脂性渗出物，尘埃附着，发出恶臭味，表皮增厚，干燥，皲裂，污秽不堪，继而病猪呼吸困难，衰弱，出现伴有脱水症状的败血症而死亡。 病理变化

刮掉结痂的皮肤表层与真皮层交接处有出血点。全身淋巴结肿胀，出血。心冠脂肪出血，心脏表面有大小不等的脓性坏死灶。肝脏、脾脏肿胀瘀血。

诊断

根据发病情况、临床症状和病理变化可做出本病的初步诊断，为确诊需做进一步的实验室检查。

(1)无菌挑取病死猪心脏、肝脏涂片，革兰氏染色后镜检，见到多量单个球形、成对或葡萄状排列的革兰氏阳性菌。

(2)将病死猪心脏、肝脏接种于普通营养琼脂培养基，37℃培养24小时。形成表面光滑隆、边缘整齐、不透明、白色的圆形菌落，继续培养后，菌落变成金**。挑起菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检，见到成双成簇的跟病料所见相同的具有典型葡萄状排列的菌体。

(3)生化试验：将菌株接种于乳糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露醇培养基中，产酸不产气。靛基质试验阴性，尿素酶试验阳性。

由此可诊断该批子猪患葡萄球菌皮炎病。

治疗

（1）发现病猪后即隔离，然后对病猪污染的圈舍及养猪环境用2%烧碱彻底消毒，3天/次。

（2）对出现临床症状的子猪肌肉注射恒丰强公司生产的强效阿莫西林（20毫克每千克体重）配丰强之星（0.2毫升每千克体重）肌肉注射，每天1次，连用5天。

（3）对母猪用水溶性阿莫西林拌料，连用5天。

（4）对皮肤已经感染葡萄球菌的子猪，用2%龙胆紫液涂擦。

如此用药5天后，发病子猪的葡萄球菌皮炎病得到控制，无再蔓延传染的现象，95%的子猪均恢复正常，有几头病重的子猪恢复不够良好，取淘汰措施。

常见猪病的防治

、一、猪瘟与混合感染症

（一） 猪瘟

目前猪瘟的发生主要是由两方面造成。其一免疫抑制，市场上出售猪瘟疫苗价位不等，有一支 2 元的、一支 4 元的、 6 元的、 8 元的和 16 元的。多数养猪场购置便宜的疫苗，免疫时加大注射剂量，结果导致免疫抑制；其二免疫程序混乱。

猪瘟快速诊断：先看活猪，再看死猪

活猪：

高温（稽留热， 40 ℃ — 41 ℃ ，不超过 41 ℃ ） 双眼结膜炎（轻红重肿） 前腿好使，后躯瘫麻（坐骨神经受损伤） 皮肤毛孔出血 实验室检查白细胞数减少（病） 抗菌药治疗无效 腹股沟淋巴结肿痛

死猪：

全身淋巴结（大理石样淋巴结） 脾脏出血性梗死

依据上述两条，可 90% 确定为猪瘟。

综合防制：

定健康猪要注射猪瘟疫苗

病猪不要乱扔，不能注射疫苗，只打免疫血清（小猪 2～4倍，大猪6～8倍 ）

药物治疗：抗药 高效抗菌药（防继发感染） 免疫增强剂 大量 v c

（二）与猪瘟混合感染的疾病

1. 猪附红细胞体病 （立克次氏体病、红皮病）

快速诊断：

活猪：高热 皮肤苍白（贫血、黄疸） 黄染 红皮（先肿大，然后全身通红，最后发展为脐部到会阴通红）

死猪：胆汁胶胨状 红皮（脐部到会阴）

仔猪：高温 苍白 黄染 死亡率高 僵猪

综合防制：

杀虫 加强消毒 减少应激 补铁 补钴

病猪：高效抗菌药 vb12 免疫增强剂 保肝利胆药

2. 猪传染性胃肠炎 （ rna 、冠状）

快速诊断：

活猪：上吐下泻 频频喷射性腹泻 恶臭灰褐水便 脱水消瘦

死猪：卡他出血性胃肠炎 肠系膜淋巴结肿大 乳糜管空虚 肾肿（由于尿酸盐沉积）

综合防制：

好产仔季节（避免冬季） 打疫苗

病猪：抗药物 抗菌药 免疫增强剂 v b1 （粘膜保护剂） 补液类药

4. 猪传染性胸膜肺炎 （放线菌、属革兰氏阴性菌）

快速诊断：

活猪：

各阶段猪均发病（尤其 4 ～ 6 月龄 ） 高热 短期吐泻 呼吸困难 皮肤发绀（耳朵、四蹄） 实验室可检出 放线菌

死猪：

大叶性肺炎 纤维素性胸膜炎 胸腔积液

综合防制：

淘汰阳性猪

6 ～ 10 月龄的猪注射两次油苗

发现病猪隔离治疗，可选奎诺酮类、氟苯尼考、卡那霉素、磺胺类药物

特别推荐 914 、砷制剂

5. 猪肺疫 （巴氏杆菌）

快速诊断：

活猪：高温 咽喉炎 败血症 纤维素性胸膜肺炎 红脖紫斑

死猪：败血症 咽喉炎 纤维素性胸膜肺炎

综合防制：

加强消毒，使用高效抗菌药

6. 仔猪白痢 （迟发性大肠杆菌病）

快速诊断：

活猪： 10 ～ 30 日龄仔猪发病 体温无明显变化 减食 饮水增多 突然腹泻 白色稀粪

死猪：卡他性胃肠炎 肠系膜淋巴结轻度水肿 胆囊肿大

综合防制：

妊娠母猪不打苗

补铁、补硒

炒糊高粱

高效抗菌止泻药 硒、铁 v a v d 补液（等渗糖：硒为 4 ： 1 ）

二、 腹泻症

1. 传染性胃肠炎 （已经介绍过）

2. 圆环病 （ dna ）：破坏巨噬细胞系统，引起免疫抑制

快速诊断

① 仔猪断乳后多系统衰竭综合征

病猪：减食 萎靡 嗜睡 发热 贫血性黄疸 喘咳 腹股沟淋巴结肿大 5 ～ 10 倍 腹泻 渐进性消瘦

死猪：皮肤粘膜苍白、黄染 脂少、肌缩 腹股沟淋巴结明显肿大 橡皮肺（纤维化肉变、间质增宽） 肾肿 肝脾出血点 心肌炎

② 仔猪传染性先天性振颤：有外界刺激会颤

③ 母猪引起繁殖障碍：高热 减食 流产 受胎率极低 病后不孕

④ 肥猪间歇性肺炎：沉郁 减食 喘咳 生长缓慢

综合防制：

减少应激

加强消毒

药物防制：抗药 抗菌药 免疫增强剂

3. 轮状病 （ dna ）：人、畜、禽共患病

主要发生在幼龄猪，特别是 2 月龄内的仔猪

寒冷季节多发，特别是在晚秋、冬季、早春

快速诊断：

死猪： 2 月龄内仔猪发病 呕吐 突然腹泻（轻则黄白稀便，重则黑水便）

死猪：卡他出血性小肠炎 肠系膜淋巴结肿大

综合防制：

母猪注射疫苗，仔猪停止哺乳

药物治疗：抗药 抗菌药 免疫增强剂 补液 收敛药

4. 猪流行性腹泻 （冠状）

快速诊断：

病猪：各年龄段猪均可发生 主要发生在冬季 体温无明显变化 呕吐 持续恶臭水泻（区别于传染性胃肠炎）

死猪：卡他性小肠炎 肠系膜淋巴结水肿

综合防制：

补锌、补盐、定期免疫

药物治疗：康复猪抗凝血 补液

三、 猪繁殖障碍症

1. 细小病 （ dna ）：

快速诊断：

活猪：头胎流产，二胎以后不流产

初产母猪发生繁殖障碍，康复后可获得终生免疫

死猪：轻度子宫内膜炎

综合防制：

打疫苗

2 伪狂犬病

快速诊断：

活猪：

仔猪：高热 沉郁 气喘 减食 吐泻 脑脊髓炎症状

妊娠母猪：流产 产死胎、木乃伊胎、弱仔

死猪：脑膜充血、出血 脑脊髓液增多 小叶性肺炎 肝脾坏死 扁桃体肿 卡他性出血性胃肠炎

综合防制：

注射疫苗

病猪注射高免血清 v b

3 猪乙脑 （引起）：多发生在夏季，蚊虫叮咬传播

快速诊断：

母猪：流产 产死胎、木乃伊胎、弱仔

公猪：单侧睾丸炎

综合防制：

灭蚊蝇

注射疫苗

镇定药物、抗炎药物

4 布病

快速诊断：

公猪：两侧睾丸炎

5 猪肠道感染症

快速诊断：

流产后再不妊娠

6 猪的衣原体病 ：地方流行

快速诊断：

公猪：睾丸炎、附睾炎 尿道炎 2 ～ 4 月龄常发生肺炎、眼炎、多发性关节炎、多浆膜炎

综合防制：

驱鸟 灭鼠 减少应激 消毒 注射疫苗

治疗：高效抗菌素（土霉素、强力霉素）

7 猪弓形体病 （ 50 斤以上的猪易得）

快速诊断：

妊娠母猪：早产 产死胎、弱仔

后备猪：高温 体表发绀 呕吐 气喘 腹股沟淋巴结肿大

综合防制：

慢性猪淘汰

场内禁止养猫

灭鼠

治疗：磺胺类药物、螺旋霉素2013/4/5 11:17:11

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我认为，“溴酚蓝带（约300bp）前后各有一条带，且两条带亮度差不多”，而“阴性对照（没加模板）只在溴酚蓝带后有一条带”。可以用实验组和阴性对照组比较，若两者溴酚蓝带后的带位置一直，那么应该是引物二聚体。

至于PCR，应从很多方面考虑，我有一个优化的方法：

PCR必需具备下述基本条件：模板核酸（DNA或RNA）、人工合成的寡核苷酸引物、合适的缓冲体系、合适的Mg2+浓度、三磷酸脱氧核苷酸、耐热DNA聚合酶、温度循环参数、其它因素如二甲基亚砜、甘油、石蜡油、明胶等。

1．引物

PCR扩增产物的大小是由特异引物限定的，因此引物的设计与合成对PCR的成功与否有着决定性的意义。

l引物合成的质量：合成的引物必须经聚丙烯酰胺凝胶电泳或反向高压液相层析（HPLC）纯化。因为合成的引物中会有相当数量的“错误序列”，其中包括不完整的序列和脱嘌吟产物以及可检测到的碱基修饰的完整链和高分子量产物。这些序列可导致非特异扩增和信号强度的降低。引物不用时应存于–20℃保存。引物的设计原则：见引物的设计

l引物的用量：一般PCR反应中引物的终浓度为0.1~1umol/L，引物浓度过低则产物量降低；引物浓度过高会促进非特异产物合成，还会增加引物二聚体的形成，它们与靶序列竞争DNA聚合酶和dNTP,从而使靶序列的扩增量降低。

2．缓冲液

目前最为常用的缓冲体系为10~50mmol/L。Tris是一种双极性离子缓冲液，20℃时其pKa值为8.3,△pKa值为–0.021/℃。因此,20 mmol/L Tris–HCI(pH8.3,20℃)在实际PCR中,pH变化于6.8~7.8之间。改变反应液的缓冲能力,如将Tris浓度加大到50mmol/L, pH8.9,有时会增加产量。反应混合液中50mmol/L以内的KCl有利于引物的退火, 50mmol/L NaCl或50mmol/L以上的KCl则抑制Taq DNA聚合酶的活性。有些反应液中以NH4+代K+,其浓度为16.6mmol/L。反应中加入小牛血清白蛋白(100μg/ml)或明胶(0.01%)或Tween20(0.05%~0.1%)有助于酶的稳定,反应中加入5 mmol/L的二巯苏糖醇(DTT)也有类似作用,尤其在扩增长片段(此时延伸时间长)时,加入这些酶保护剂对PCR反应是有利的。

3.Mg2+

lMg2+是Taq DNA聚合酶活性所必需的，也影响着引物的退火，模板与PCR产物的解链温度，产物的特异性，引物二聚体的形成等。Mg2+浓度过低时，酶活力显著降低；过高时，则酶催化非特异的扩增。

lPCR混合物中的DNA模板、引物和dNTP的磷酸基因均可与Mg2+结合，降低Mg2+浓度，而Taq DNA聚合酶需要的是游离Mg2+。因此，PCR中Mg2+的加入量要比dNTP浓度高0.2~2.5m mol/L。最好对每种模板,每种引物均进行Mg2+浓度的优化。另外还需注意引物和模板DNA原液中如含EDTA等螯合剂也会影响游离Mg2+浓度。

l优化Mg2+浓度法:首先须知模板DNA,引物和dNTP浓度和设定的PCR循环参数。反应中的PCR缓冲液中不加Mg2+。Mg2+是从10mmol/L MgCl贮存液中逐一加入反应管中。开始以0.5mmol/L递增(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5~5.0mmol/L)，在确定了Mg2+大概浓度以后，再在该浓度上下，以0.2 m mol/L递增和递减几个浓度来精确确定Mg2+的最适浓度。

4．三磷酸脱氧核苷酸

0?2?0?2 l贮备dNTP液应用NaOH调pH至中性，其浓度用分光光度计测定。贮备液为5~10 mmol/L，分装后–20℃保存。在PCR的重复热循环过程中其热稳定性应为：50循环后约有50%仍为dNTP。

l 反应中每种dNTP（dATP，dGTP，dTTP和dCTP）的终浓度为20―200umol/L,在此范围中，PCR产物量、特异性合成和忠实性间的平衡最佳。所用的四种dNTP终浓度应相等，以使错误掺入率降至最低。最低的适宜dNTP浓度可根据特定靶序列长度和碱基组成来确定。保持四种dNTP的浓度均在10~15umol/L以上，对保持碱基掺入的忠实性是很重要的。dNTP终浓度大于50 mmol/L时会抑制Taq DNA聚合酶活性。

ldNTP的类似物也可掺入PCR产物。

5．耐热DNA聚合酶

l自从耐热Taq DNA聚合酶引入PCR后，又有多种耐热DNA聚合酶（VENT和Tth等）相继用于PCR。目前仍以Taq DNA聚合酶应用较多。不同来源聚合酶制备条件、测定方法和（或）单位定义有所不同，使用时需加以注意。

l酶的需要量可根据不同的模板分子或引物而变化。当优化PCR时，最好在每100μ1反应体积中加入0.5~5U酶的范围内试验最佳酶浓度。如果酶浓度太高，则琼脂糖凝胶电泳中会出现非特异扩增带；过低时，则靶序列产量很低。

lPCR后可通过下述方式之一灭活Taq DNA聚合酶：（1）99~100℃加热10min；(2)加入EDTA-Na至10mmol/L螯合Mg2+；（3）酚一氯仿抽提、乙醇沉淀PCR产物。

6．温度循环参数

①变性温度与时间：PCR的变性一步很重要，此步若不能使靶基因模板和（或）PCR产物完全变性，变会导致PCR失败。典型的变性条件是95℃30s或℃30s，更高的温度可能更有效，尤其是对富含G+C的靶基因。DNA在其链分离温度（strand separation temperature,Tss）时的变性只需几秒钟，然而反应管内部达到Tss还需一定时间。变性温度太高会影响酶活性。最简单的方法是在加Taq聚合酶前选使模板在先℃变性lmin，对PCR的成功亦有益处。环状质粒DNA模板最好酶切线性化，因环状DNA复性极快。在扩增短片段（100~300bp）时，可用简便、快速的两步PCR法，同时在5~10个循环后，将变性温度降至87~90℃可改善PCR产量。具体降低程度则根据具体反应和使用的PCR仪而定。

②复性温度与时间：如果说变性温度对PCR反应的成败是关键，那么复性温度则决定着PCR的特异性。引物复性所需的温度与时间取决于引物的碱基组成、长度和浓度。合适的复性温度应低于扩增引物在PCR条件下真实Tm值的5℃。根据下式计算最适复性温度（Tm）有助于PCR的成功。

另一种更简便的方法是通过引物的有效长度(Ln)来估算。在此，还需引入另一概念，即有效启动温度（effective priming temperature Tp）。Tp是最佳引物介导扩增发生时的最高温度。Tp在一定范围（20~35个核苷酸）内与Ln呈直线相关。Lp=22+1.45(Ln):其中Ln=2（G+C）+（A+T）最适复性温度为Tp±2~5℃。Tp值较引物模板的Tss值高5~10℃，这是因引物复性后，DNA聚合酶很快发生聚合反应，在引物3’端加上数个碱基使引物–模板更稳定，易于在较高温度下发生延伸。研究表明，引物的复性是受动力因素控制的，而不是受热力学参数控制的。它取决于引物解离与延伸效率间的平衡。Tp仅是PCR的最适复性温度，也是PCR最佳特异性温度，在等位基因特异PCR（AS–PCR）时决定Tp很重要。Tp值基本上不受Mg2+浓度影响，当Mg2+由1.5mmol/L升至10 mmol/L时，Tp才升高3℃。确定了复性温度后，复性时间并不是关键因素。但复性时间太长会增加非特异的复性。复性时间也不能太短（≥30s），如用手控温度反应，复性状态的时间不能太长，耽搁过长会增加非特异复性。

③延伸温度与时间

引物延伸温度一般为72℃（较复性温度高10℃左右）。不合适的延伸温度不仅会影响扩增产物的特异性，也会影响其产量。72℃时，核苷酸的掺入率为每秒35~100个核苷酸,这取决于缓冲体系、pH、盐浓度和DNA模板的性质。72℃延伸1min对于长达2kb的扩增片段是足够的。然而，延伸时间决定于靶序列的长度与浓度。3~4 kb的靶序列需3~4 min延伸，延伸时间过长会导致非特异扩增带的出现。PCR中前几个循环延伸时间应足够长以使靶序列延伸完全，对很低浓度底物的扩增延伸时间要长些。

④循环数

循环数决定着扩增程度。在其它参数都已优化条件下，最适循环数取决于靶序列的初始浓度。过多的循环会增加非特异扩增产物的数量和复杂性（见平台效应）。当然，循环数太少，PCR产量就会极低。在初始靶序列为3X105，1.5X104，1X103和50拷贝分子时，其循环数可分别为25~30，30~35，35~40和40~45个循环。

除循环数外，扩增效率也决定扩增程度的重要因素。实验表明，以染色体DNA为模板时，第25~30个循环过程中，扩增DNA明显增加。扩增程度（Y）、起始DNA量（A）、扩增效率（R）和循环数（n）间的关系为：Y=A（I+R）n效率为100%时，25个循环后，Y=225·A=33 554 432A，而效率R=90%，n=25时，Y=1.925=9 307 649A，扩增产物减少了72%，由此可见扩增效率对扩增程度的影响。

⑤其它因素

高温起动（hot start）：由于Taq DNA聚合酶低温下仍具有活性。因此在一般PCR反应的开始加热变性DNA后再加酶的过程中，引物可与模板发生非特异复性，这些非特异复性在达到72℃前就由Taq 聚合酶在其3'端聚合上几个碱基并稳定了这种非特异复性引物。因此，可出现非特异延伸和扩增。用高温起动法便可克服这一缺点，即使Taq聚合酶仅在反应达到较高温度（>70℃）时才发挥作用。这可通过在高温（>70℃）下加入某些必需因子（DNA聚合酶，模板DNA，Mg2+或引物等）来控制。这种方法不仅可增加PCR的特异性，还能增加其敏感性，并可减少引物二聚体的形成和引物的自我复性。这是因为在扩增前加热可促进引物的特异复性与延伸，因此增加了有效引物的长度。

7．PCR促进剂：

1．二甲基亚砜（DMSO）：许多耐热DNA聚合酶厂定推荐在PCR反应中加入10%DMSO，这可能是DMSO有变性DNA的作用。DMSO的使用对大肠杆菌DNA聚合酶I K1enow片段是有益的，但对Taq DNA聚合酶有抑制作用，一般反应中应尽量不用DMSO。不过，在复合PCR中可以用。

2．甘油：有报道，反应中加入5%~20%甘油有助于PCR反应的复性过程，尤其对G+C含量高和二级结构多的靶序列以及扩增长片段（>1.5kbp）更适用。

3．氯化四甲基铵（TMAC）：在反应中加入1X10–4~1X10–5mol/L的TMAC可促进PCR，去除非特异扩增，而不抑制Taq聚合酶。

4．T噬菌体基因32蛋白质（gp32）：加入0.5~1μl的gp32（lnmol/L, PHarmacia）可使Taq聚合酶对长片段DNA的扩增改善至少10倍。

5．石蜡油：反应中所用石蜡油质量要高，不能含抑制Taq DNA聚合酶活性的杂质。加石蜡油目的是防止反应液蒸发后引起的冷却与反应成分的改变。石蜡油的有无对反应影响较大。但现在PE–Cetus公司又研制了一种新型PCR仪–9600型基因扩增PCR系统，免除了加石蜡油的步骤。

希望对你有用。